Formation
Le développement des méthodes lazers pour étudier les interactions
moléculaires in vivo et in vitro et l’exploitation des phénomènes FRET
(Fluorescence Resonance Energy Transfer).
Le FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) est un phénomène de la
mécanique quantique qui se produit entre un donneur fluorescent (vert)
et un accepteur fluorescent (rouge) qui se trouvent très proches
(distance<100Å) quand le spectre d’émission donneur chevauche le
spectre d’excitation de l’accepteur. (Förster, 1948). Dans des
conditions idéales de FRET, l’excitation de D provoque un transfert
d’énergie (pas des photons) vers A. qui émet dans ses longueurs d’onde.
Nous pouvons utiliser ce phénomène pour étudier avec le microscope
confocal les interactions entre 2 molécules. Nous couplons les
molécules qui nous intéressent avec des fluorochromes soigneusement
choisis. Si elles sont proches, l’accepteur "s’allume", sinon il reste
"éteint".
3D/4D FLIM dans les compartiments subcellulaires des cellules vivantes.
Les images FLIM seront obtenues avec une résolution spatiale en 3D
spatial resolution or 4D (3D+temps) en utilisant des systemes de
microscopie confocale (confocal scanning laser) pour des cellules
vivantes. En visualisant les compartiments sub cellulaires avec des
molécules de GFP-conjuguées aux proteines specifiques de ces
compartiments, les cinetiques des interactions moleculaires detectées
par FLIM peuvent être assignées à certains compartiments subcellulaires.
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